HPLC 정량 레포트(report)
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작성일 19-06-16 18:07본문
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HPLC 실습
시료 중 카페인의 정량
2xxx.5.17. 11:00~12:00
생명화학工學(공학) 과 2007171xxx
김종욱
1. Instruction
가. 기기원리
- 일반적인 HPLC 기기구성
1) 탈기장치 - Degasser
이동상 중의 용존산소, 질소, 기포 등을 제거하여 컬럼 내에서 이동상(mobile phase)에 대한 댐핑 현상을 줄여주는 장치이다. 따라서, 펌프는 일정한 압력과 유속을 유지할 수 있도록 해야하며, 다양한 용매를 사용할 수 있으며, 또한 용매에 대한 내구성이 뛰어나야 한다. 겔 투과…(투비컨티뉴드 )
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다.
펌프의 종류에는 Isocratic pump와 Gradient pump 가 있따
Isocratic pump(단일용매펌프)는 analysis시간 동안 이동상 용매 조성의 變化가 없고 Gradient pump는 analysis시간 동안 이동상 용매 조성의 變化를 조절할 수 있따
3) 시료주입기 - Injector
analysis하고자 하는 시료를 용매의 흐름에 실어주는 것으로써 샘플을 주입하는 방식에 따라 크게 자동시료주입기 (Auto Injector/Autosampler) 와 수동시료주입기(Manual Injection)로 구분할 수 있따
4) 컬럼 column
컬럼은 충진제의 물리적 特性(특성) 및 요구되는 분리양식에 따라 다양하다. 탈기방법으로는 이동상 용매에 헬륨 가스를 주입하여 용존된 기포 등을 제거하는 헬륨 퍼징(Helium sparging) 혼합된 이동상 용매를 멤브레인 필터를 이용하여 여과(membrane filtering vacuum filteration), 강력한 초음파를 이용하여 탈기하는 방법(ultra-sonication) 등이 사용된다
2) 송액장치 - Pump
HPLC 시스템의 펌프의 역할은 이동상으로 사용되는 용매를 저장용기로부터 시료주입기를 거쳐 컬럼으로 연속적으로 보내어 최종적으로는 검출기를 통과한 후 이동상인 용매와 시료 주입기를 통해 주입된 시료가 밖으로 나올 수 있도록 압력을 가해 주는 장치이다.