[자연과학]생명화학실험 - RT-PCR, Bradford assay, SDS page, Genomic DNA prep
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작성일 20-07-27 13:29
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맨 먼저 reverse tran스크립트ase로 RNA를 complementary DNA(cDNA)로 역한다. 그리고 Ge…(투비컨티뉴드 )
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실험결과/화학
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순서
설명
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다.
downstream primer는 크게 mRNA 뒤에 poly(A) tail이 붙는 것을 응용한 oligo(dT) primer, gene specific primer, 그리고 여기저기 붙는 random primer 이렇게 3가지가 존재한다.
Oligo(dT) primer를 쓰면 분리한 RNA 중 mRNA는 모두 cDNA로 만들어진다. 생명화학 實驗 Report
(RT-PCR, Bradford assay, SDS page,
Genomic DNA prep)
1.Introduction
RT-PCR
DNA 에서는 exon과 intron이 있으므로 DNA를 template로 하는 경우에는 exon과 intron이 모두 증폭될 수 있따 하지만 intron은 exon에 비해서 매우 크기 때문에 exon 중에 몇 개를 한꺼번에 증폭하려면 DNA로는 힘들다. 이 경우는 앞에서 說明(설명) 한 PCR을 시행하기 이전에 RNA로부터 DNA를 합성해 주는 효소(RNA-dependent DNA polymerase)인 reverse tran스크립트ase를 처리한다. 이러한 이유 때문에 mRNA를 template로 해서 PCR하는 방법을 RT-PCR(Reverase Tran스크립트ase-Polymerase Chain Reaction)이라고 합니다. 더구나 intron sequence는 일부를 제외하고는 중요성이 떨어진다고 인식되어 밝히지 않은 것이 많아 GenBank에서도 찾을 수 없는 경우가 많다. 이때는 downstream primer만 사용하게 되는데 왜냐하면 RNA는 single strand이기 때문이다 그 후 생성된 cDNA에서 일반적인 PCR의 과정을 밟아서 유전자를 증폭한다.
