[자연과학] 일반생물학 실험 - Mini Preparation
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작성일 20-08-25 16:40
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가장 기본적인 DNA조작기법인 재조합DNA(recombination DNA) 기술은 필요로 하는 외부 DNA단편을 vector라고 부르는 운반자 plasmid DNA분자에 연결시켜 목적으로 하는 DNA부분만 증폭시킬 수 있는 새로운 재조합 DNA를 만드는 것이다. 단, chromosomal DNA는 분리과정에서 linear형태가 되고 크기가 커서 대부분 침전의 형태로 제거될 수 있어 이 방법으로도 100n…(省略)
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[자연과학] 일반생물학 실험 - Mini Preparation
다.
주로 mini preparation(mini prep.)이라고 부르는 이 방법은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다.
Introduction
유전자 재조합은 DNA를 목적에 따라 적절히 자르고 붙여서 유전물질을 원하는 형태로 개조시키는 과정이다. 이 때 원하는 DNA분자가 만들어졌는지를 조사하기 위하여 형질전환체 중 여러 colony를 후보로서 택하여 형질전환체 내에 들어있는 plasmid DNA를 조사하여야한다. 이렇게 反應시킨 DNA용액을 대장균에 형질전환 시킨다.
실험결과/생물의학
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[자연과학] 일반생물학 실험 - Mini Preparation
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Title : Mini Preparation
Objective : DNA의 크기차이에 의해 분리하는 방법인 alkaline lysis method를 이용하여 정제된 DNA의 양을 불린다. 이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것이다. 여러 가지 방법이 있지만 가장 보편적으로 쓰이는 방법이 Alkaline lysis method이다. 이 때 plasmid DNA분리에 사용되는 preparation(of plasmid DNA) 방법은 많은 후보를 빠른 시간에 分析(분석)하는데 유용하게 사용되어진다. 기본적인 원리는 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA만을 분리하는 것이다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하여 구분하여 분리하기가 쉽지 않다. 즉, 제한효소를 사용하여 목적 DNA와 plasmid DNA를 잘라 이 두 분자를 ligase를 사용하여 연결시키는 것이다.
