Ni-NTA column을 이용한 단백질 정제
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작성일 20-09-04 00:12본문
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Ni-NTA column을 이용한 단백질 정제
순서
1. Introduction
2. Materials & Methods
(1) Ni-NTA column을 이용한 단백질 정제
(2) SDS-PAGE(polyacrylamide gelelectrophoresis)
3. Ni-NTA & SDS-PAGE Result
4. Discussion
5.Reference
우리가 實驗(실험)한 F.T의 결과를 보면, C.E와 비교해서 한부분의 밴드를 제외하고, Ni-NTA에 특이적인 affinity를 나타내지 않는 단백질들은 모두 흘러 나왔다는 사실을 알 수 있따 또, SDS-PAGE를 통한 Marker와의 비교로 C.E에는 나타나고 F.T에는 나타나지 않는 밴드가 약 20KDa 정도의 크기를 갖는 단백질이라는 것 또한 확인할 수 있따
이 實驗(실험)에서는 Elution 과정이 중요한데 histidine과 구조가 비슷한 Imidazole을 고농도(100~300mM)로 Buffer를 만들어서 컬럼에 순차적으로 가하여 histidine과 Ni2+과의 결합이 약해지게 되면 표지된 단백질이 떨어져 나오는 과정이다.
Elution1,2,3 결과를 index로 보면, E1은 아무래도 이전과정에서의 wash buffer가 포함되어있어서 우리가 분리하고자 하는 단백질의 밴드가 선…(To be continued )
설명
레포트6
레포트/공학기술
어떤 세포내에 존재하는 특정한 단백질을 Ni-NTA를 이용한 Affinity chromatography를 통해 정제해보고 궁극적으로 SDS(sodium dodecyl sulfate)를 포함한 SDS-PAGE(polyacrylamide gelelectrophoresis)를 실시하여 직접 그 단백질이 분리되었는지 눈으로 확인하는 실험 후 작성한 실험레포트입니다.레포트6 , Ni-NTA column을 이용한 단백질 정제공학기술레포트 ,
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어떤 세포내에 존재하는 특정한 단백질을 Ni-NTA를 이용한 Affinity chromatography를 통해 정제해보고 궁극적으로 SDS(sodium dodecyl sulfate)를 포함한 SDS-PAGE(polyacrylamide gelelectrophoresis)를 실시하여 직접 그 단백질이 분리되었는지 눈으로 확인하는 실험 후 작성한 실험레포트입니다.