플라스미드 DNA 정제
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작성일 19-08-25 00:33본문
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플라스미드 DNA 정제
2013년 10월 30일
일반생물학 實驗(실험)
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플라스미드 (Plasmid) DNA
대장균 등의 세균 내에 존재하는 환형의 DNA
염색체 DNA에 비해 훨씬 작은 크기 (~250kbp)
복제원점을 자체적으로 가지고 있어 염색체 DNA와는 별도로 스스로 복제
하나의 세포 내에 여러 종류, 많은 수로 존재 가능
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플라스미드의 유전Engineering적 이용
벡터 (vector)
: 원하는 유전자를 집어넣어 생물체 내로 운반, 대량 생산해냄으로써 유전Engineering에 유용하게 사용하는 도구
- 그 벡터로써 plasmid가 매우 중요하게 굉장히 보편적으로 이용
플라스미드 벡터의 구성 및 원리
복제원점 (replication origin) 존재
염색체와 독립적으로 케어 가능
항생제 내성 유전자가 포함
Multiple cloning site 존재
이곳에 원하는 유전자를 삽입...
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플라스미드 DNA 정제
2013년 10월 30일
일반생물학 實驗(실험)
_SLIDE_2_
플라스미드 (Plasmid) DNA
대장균 등의 세균 내에 존재하는 환형의 DNA
염색체 DNA에 비해 훨씬 작은 크기 (~250kbp)
복제원점을 자체적으로 가지고 있어 염색체 DNA와는 별도로 스스로 복제
하나의 세포 내에 여러 종류, 많은 수로 존재 가능
_SLIDE_3_
플라스미드의 유전Engineering적 이용
벡터 (vector)
: 원하는 유전자를 집어넣어 생물체 내로 운반, 대량 생산해냄으로써 유전Engineering에 유용하게 사용하는 도구
- 그 벡터로써 plasmid가 매우 중요하게 굉장히 보편적으로 이용
플라스미드 벡터의 구성 및 원리
복제원점 (replication origin) 존재
염색체와 독립적으로 케어 가능
항생제 내성 유전자가 포함
Multiple cloning site 존재
이곳에 원하는 유전자를 삽입
유전자 클로닝 (cloning)
: MCS 부분을 제한효소로 절단 원하는 유전자를 넣고 봉합 재조합 DNA 제작
대장균 형질전환 (재조합 DNA를 대장균 내에 삽입) 배양을 통해 대량생산
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▣ 종류
정제 방법에 따른 분류
Alkaline lysis 방법
: Sodium dodecyle sulfate(SDS), NaOH를 함유하는 용액으로 처리하여 용균 되는 것을 이용
Boiling 방법
: lysozyme, triton, 열처리 등으로 bacteria는 깨짐, 적은 양의 plasmid 분리 시 사용하는 방법
Ultra centrifuge를 이용한 방법
: 원심분리를 통해 크기에 따라 분리
CsCl-EtBr의 밀도구배 원심분리법
: CsCl의 농도에 따라 linear DNA, plasmid DNA에 결합하는 EtBr양의 차이를 이용한 방법
Plasmid DNA가 linear DNA보다 밀도가 증가해서 원심…(省略)
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플라스미드 DNA 정제
레포트/공학기술
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다.